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NRPA37 重组BirA生物素连接酶(CBD标签)(rC-BirA)

发布日期:2020-05-09 阅读次数:2781

品    名:重组BirA生物素连接酶(CBD标签)(Recombinant BirA Biotin Ligase, CBD-tag; rC-BirA)

目 录 号:NRPA37S

规    格:100μg,1 mg,10 mg

产品形式:冻干粉,冻干前溶液为10mM Tris-HCl, pH8.0溶液

分 子 量:44.5kDa

等 电 点:7.14

活    性:≥4000 U/mg

纯    度:≥95%(SDS-PAGE检测)

浓度测定:280nm吸收法,摩尔吸光系数为6.85×104(mol/L)-1·cm-1,即c(g/L) = A280nm/1.54

内 毒 素:≤5EU/mg

来    源:大肠杆菌

保存条件:-20℃保存

有 效 期:3年


相关介绍:

  BirA生物素连接酶由大肠杆菌中的BirA基因编译表达,可用于特定蛋白质的生物素化反应,通过该酶的催化反应可将生物素共价连接到特定的蛋白质上。特定的蛋白质指含有AviTag的标签蛋白,可通过基因工程方式获得,AviTag一般由15个氨基酸残基组成的小标签(GLNDIFEAQKIEWHE),可以与目标蛋白的N端或C端融合,融合了AviTag的蛋白在BirA催化作用下,可将生物素共价连接到该标签中的赖氨酸上,实现定向生物素化。

  重组BirA生物素连接酶(CBD标签)由BirA基因与CBDtag、HisTag融合表达,并高度纯化,具有高活性、高效率、高纯度、高稳定性的特点,可用于含AviTag重组蛋白的体外生物素化。

  反应体系:50mM Bicine缓冲液,pH8.3,10mM ATP,10mM MgSO4,50μM生物素,40μM AviTag重组蛋白,10μg/ml rC-BirA,可参考下表加入各组分,30℃反应30min。也可以在其他温度反应,如室温25℃反应1-4h,或4℃反应过夜,不同的蛋白可能存在反应速率不一样的情况,可适当调节酶量,以获得更好的反应效果。除Bicine缓冲液外,其它缓冲液也可用于反应,如20mM Tris-HCl等,有些试剂会降低该酶的催化活性,如NaCl、甘油、硫酸铵、β-巯基乙醇等,应尽量降低样品中这些试剂的含量。反应结束后的样品可以通过透析、超滤、凝胶过滤等方式去除试剂,如需纯化可用我司的ee-Streptavidin NUPharose FF可逆亲和层析进行纯化,特异性纯化生物素化蛋白。

表1 rC-BirA催化AviTag重组蛋白生物素化参考反应体系

组分

体积

Buffer A: 500mM Bicine缓冲液,pH3.3

0.1ml

Buffer B: 100mM ATP,100mM MgSO4,500μM生物素

0.1ml

80μM AviTag重组蛋白

0.5ml

100μg/ml rC-BirA溶液

0.1ml

蒸馏水

0.2ml

总体积

1.0ml

活性定义:在上述反应条件下,30℃、30min催化1nmol AviTag重组蛋白生物素化所需的酶量为1U。

图片1.jpg

M:蛋白质分子量标准

Lane 1:rC-BirA

注意:本产品仅限于科研使用。


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